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產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱(chēng):鴨肝炎病毒3型RT-PCR試劑盒

  • 產(chǎn)品型號:50次
  • 產(chǎn)品廠(chǎng)商:通蔚生物
  • 產(chǎn)品價(jià)格:0
  • 產(chǎn)品庫存:0
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簡(jiǎn)單介紹:
鴨肝炎病毒3型RT-PCR試劑盒一站式,用戶(hù)不需要單獨準備每種成分,包括引物和對照。根據鴨肝炎病毒3型的保守基因序列設計的引物,具有良好的特異性。 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。 使用一管式 RT-PCR 技術(shù),RT 和 PCR 兩步在一個(gè)試管內完成,不需要中間轉移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。本產(chǎn)品只能用于科研,不能用于臨床。
詳情介紹:
鴨肝炎病毒3型RT-PCR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn): 
1. 一站式,用戶(hù)不需要單獨準備每種成分,包括引物和對照。
2. 根據鴨肝炎病毒3型的保守基因序列設計的引物,具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù),RT 和 PCR 兩步在一個(gè)試管內完成,不需要中間轉移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研,不能用于臨床。
規格及成分:

編號

成分

規格

試劑一

5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer

200 μL(橘黃蓋)

試劑二

MMLV-Taq Mix

75 μL(紅蓋

試劑三

超純水

1 mL(亮黃蓋)

試劑四

鴨肝炎病毒3型 RT-PCR 引物混合液

100 μL(白蓋)

試劑五

鴨肝炎病毒3型 RT-PCR 陽(yáng)性對照(1×10E8 /μL)

50 μL(黃蓋)

試劑六

使用手冊

1 份

注:為避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對照,只提供專(zhuān)一的DNA 片段作為陽(yáng)性對照。 
運輸及保存:
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。收到貨后陽(yáng)性對照需要跟其他成分分開(kāi)放置,因為其容易污染其他成分,造成假陽(yáng)性。
自備試劑:
樣品 RNA。
鴨肝炎病毒3型RT-PCR試劑盒
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備:
1. 如果有 N 個(gè)樣品,必須設置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽(yáng)性對照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL鴨肝炎病毒3型PCR陽(yáng)性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽(yáng)性對照??梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ?。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 RNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數病毒 RNA 提取試劑盒兼容??梢赃x購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設置RT- PCR 反應(20μL 體系):
3. 如果有 N+2 個(gè)樣品,則標記 N+4 個(gè) PCR 管(額外增加的兩個(gè)管一個(gè)是RT-PCR 陽(yáng)性對照,另一個(gè)是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分:

成份

N+2 個(gè)

樣品管

RT-PCR

陰性對照

RT-PCR

陽(yáng)性對照

5×雙酶一管式RT-PCR Buffer

4 μL

4 μL

4 μL

鴨肝炎病毒3型 RT-PCR 引物混合液

2 μL

2μL

2μL

N+2 個(gè)制備的 RNA 樣品

12.5μL

--

--

超純水

--

12.5μL

--

鴨肝炎病毒3型 RT-PCR 陽(yáng)性對照的 1000倍稀釋液

--

--

12.5μL

MMLV-Taq Mix

1.5 μL

1.5 μL

1.5 μL

4.上機進(jìn)行 RT-PCR,RT-PCR 反應參數為:

過(guò)程

溫度

時(shí)間

逆轉錄

42℃

30 min

預變性

95℃

5 min

PCR 反應35個(gè)循環(huán)

95℃

30 sec

58℃

30 sec

72℃

20 sec

延伸

72℃

7 min

三、電泳檢測:
5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產(chǎn)物或陽(yáng)性對照無(wú)擴增產(chǎn)物,則說(shuō)明實(shí)驗失敗,需要分析實(shí)驗失敗的原因。只有在陰性對照沒(méi)有擴增產(chǎn)物、陽(yáng)性對照必須有預期條帶出現,才有必要分析樣品的實(shí)驗結果,如果有預期片段大小的擴增產(chǎn)物則為陽(yáng)性,如果無(wú)則為陰性。 
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