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產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱(chēng):B皰疹病毒探針?lè )晒舛縋CR試劑盒

  • 產(chǎn)品型號:50次
  • 產(chǎn)品廠(chǎng)商:通蔚生物
  • 產(chǎn)品價(jià)格:3990
  • 產(chǎn)品庫存:100
  • 產(chǎn)品文檔:
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簡(jiǎn)單介紹:
B皰疹病毒探針?lè )晒舛縋CR試劑盒即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供樣品 DNA 模板。 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。提供陽(yáng)性對照,便于區分假陰性樣品。特異性高,引物是根據B皰疹病毒高度保守區設計,不會(huì )跟其他病毒 DNA發(fā)生交叉反應。本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè )晒舛?PCR 反應。
詳情介紹:
B皰疹病毒探針?lè )晒舛縋CR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽(yáng)性對照,便于區分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據B皰疹病毒高度保守區設計,不會(huì )跟其他病毒 DNA發(fā)生交叉反應。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè )晒舛?PCR 反應。
規格及成分:

編號

成分

規格

試劑一

2×Probe qPCR MagicMix

500μL(本色蓋)

試劑

熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液

1mL(黃蓋)

試劑二

B皰疹病毒qPCR引物混合液

100μL(白蓋)

試劑四

B皰疹病毒qPCR探針

50μL(棕色管)

試劑五

B皰疹病毒探針?lè )╭PCR陽(yáng)性對照(1×10E8/μL)

50μL(紅蓋)

 

使用手冊

1份

運輸及保存:
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。
自備試劑:
樣品DNA。
使用方法:
一、稀釋標準曲線(xiàn)樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例):
由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對照,只提供無(wú)傳染性的 DNA 片段作為陽(yáng)性對照。
1. 標記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專(zhuān)用模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照(試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線(xiàn)樣品。
6. 放冰上待用。重復上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標準曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
B皰疹病毒探針?lè )晒舛縋CR試劑盒
二、樣品DNA的制備: 

7. 如果有 N 個(gè)樣品,設置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽(yáng)性對照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 陽(yáng)性對照的 10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為 NC。
8. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數 DNA 提取試劑盒兼容。
三、Probe qPCR反應(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行):
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6個(gè)用于標準曲線(xiàn)。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個(gè) PCR管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個(gè)用于 PCR 陽(yáng)性對照(用第 4 號管的陽(yáng)性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10. 在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽(yáng)性對照,并且陽(yáng)性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加):

成份

N+2個(gè)樣品管

PCR陰性對照管

標準曲線(xiàn)樣品管(2-7管)

2×Probe qPCR MagicMix

10μL

10μL

10μL

B皰疹病毒qPCR探針

1μL

1μL

1μL

B皰疹病毒探針?lè )╭PCR引物混合液

2μL

2μL

2μL

N+2個(gè)待測DNA模板

7μL

--

--

超純水

--

7μL

--

7步所得標準曲線(xiàn)樣品稀釋液(2-7號)

--

--

7μL(2號樣到2號管,3號樣到3號管)

11.蓋上蓋子后上機,按下面參數進(jìn)行PCR:

過(guò)程

溫度

時(shí)間

預變性

95℃

3 min

PCR反應40個(gè)循環(huán)

95℃

15 sec

60

1 min(采集FAM通道的熒光信號)

四、數據處理:
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽(yáng)性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線(xiàn)。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線(xiàn)上推算出樣品 RNA濃度的 log 值,再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽(yáng)性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽(yáng)性對照必須有熒光對數增長(cháng),有典型擴增曲線(xiàn),Ct 值應該小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽(yáng)性。如果在 35-40 之間,則重復一次。若重復結果 Ct值小于 40,擴增曲線(xiàn)有明顯起峰,該樣本判斷為陽(yáng)性,否則為陰性。
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